세포 배양의 환경적 요인
세포 배양의 환경적 요인
1. 멸균 환경
무독성 및 무균은 시험관 내 세포 배양의 주요 조건입니다. 생체 내에서 세포의 해독 시스템과 면역 시스템은 미생물이나 기타 유해 물질의 침입에 저항할 수 있습니다. 그러나 체외 배양 과정에서 세포는 신체의 면역 체계를 보호하지 못하고 미생물을 방어하고 유해 물질을 해독하는 능력을 상실합니다. 세포가 시험관 내에서 성장하고 번식할 수 있도록 하려면 멸균 작업 영역, 양호한 개인 위생, 멸균 시약 및 배양 배지, 멸균 작업을 보장해야 합니다.
일반적인 미생물 오염에는 마이코플라스마, 박테리아 및 곰팡이가 포함됩니다. 마이코플라즈마는 치명적인 독성이 없고 장기간 세포와 공존할 수 있으며 세포에 잠재적인 영향을 미칩니다. 그러나 크기가 작아 식별이 어렵습니다. lichen red 또는 hoechst33342 염색으로 검출할 수 있습니다. 박테리아는 빠르게 증식하여 단기간에 대량으로 증식할 수 있으며 독소를 생성하여 세포를 죽일 수 있습니다. 육안으로 볼 수 있는 많은 종류의 곰팡이가 있습니다. 그들은 배양 액체 표면에 떠 있으며 사상체, 관 모양 또는 수지상 모양일 수 있습니다.
2. 적정온도
일반적으로 포유동물 및 조류 세포가 시험관 내에서 배양되기에 적합한 온도는 37-38℃이며, 부적절한 환경 온도는 세포의 성장에 영향을 미칩니다. 저온에 대한 세포의 내성은 고온에 대한 내성보다 강합니다. 저온에서는 세포의 대사 활동과 핵 분열 능력이 감소합니다. 온도가 0 ℃보다 낮지 않으면 세포 대사에 영향을 미치지 만 손상은 없습니다. 25 ~ 35 ℃에서 세포는 천천히 성장했습니다. 그러나 40℃에서 몇 시간 동안 방치하면 세포의 생존과 성장에 도움이 되지 않고 심지어 사멸할 수도 있다.
3. 적절한 삼투압
고장성 용액 또는 저장성 용액은 세포에 주름, 팽창 및 파열을 유발할 수 있습니다. 따라서 삼투압은 시험관 내 세포 배양에 중요한 조건 중 하나입니다. 시험관 내에서 배양된 대부분의 세포는 삼투압에 대한 일정한 내성을 가지고 있습니다. 실제 적용에서 260-320mmol/l의 삼투압은 대부분의 세포에 적용될 수 있습니다.
4. 가스 환경 및 pH
세포의 체외 배양은 이상적인 기체 환경이 필요하며, 산소와 이산화탄소는 세포 생존에 필요한 조건입니다. 산소는 세포의 트리카르복실산 회로에 참여하고 세포 생존, 대사 및 합성을 위한 에너지를 제공합니다. 이산화탄소는 세포의 대사산물일 뿐만 아니라 세포 성장의 필수 성분이며, 배양액의 pH를 유지하는 것과도 관련이 있습니다. 대부분의 세포에 적합한 pH 범위는 일반적으로 7.2-7.4입니다. 개방 배양에서는 5% 이산화탄소가 가장 좋았다.