세포 배양의 일상적인 관찰 방법 및 주의 사항
세포 배양의 일상적인 관찰 방법 및 주의 사항
세포를 접종 또는 계대 배양한 후, 실험자는 매일 또는 최대 1~2일 동안 세포를 일상적으로 검사해야 합니다. 세포의 형태와 성장, 배양의 pH 변화, 오염 여부 등을 관찰하십시오. 세포의 동적 변화에 따라 유체 교체 또는 계대 처리를하십시오. 비정상적인 조건이 발견되면 적시에 조치를 취하십시오.
1. 형태학적 성장 상태가 좋은 세포는 일반 현미경으로 볼 수 있으며 투명도가 크고 굴절이 강하며 윤곽이 불명확합니다. 세포가 잘 자라지 않으면 윤곽이 강화되고 액포, 지질 방울 및 기타 입자가 종종 세포질에 나타나며 세포 사이의 간격이 확대되고 세포 형태가 불규칙하거나 상피 세포가 상피 세포와 같은 원래 특성을 상실합니다. 세포. 세포가 죽을 때 일부 염료는 변성된 세포막을 통해 분해된 핵 DNA와 결합하여 착색될 수 있습니다. 따라서 트립판 블루는 종종 죽은 세포와 살아있는 세포를 식별하는 데 사용됩니다. 살아있는 세포는 염색되지 않으며 죽은 핵은 파란색입니다.
2. 1차 배양 또는 계대 배양된 세포 현탁액의 접종 후 세포 성장, 상이한 배양 기간 후에 증식하기 시작했습니다. 계대 세포주, 배아 조직 또는 유충 조직은 일반적으로 다음날 세포 성장을 보고 일주일 이내에 조각으로 연결할 수 있습니다. 접종된 세포가 병 벽 전체에서 성장한 후 시간이 지나면 다시 배양해야 합니다. 그렇지 않으면 영양소 소비 및 대사 축적으로 인해 세포가 정지 또는 분해 기간에 들어갑니다. 이때 세포 윤곽이 강화되고 미토콘드리아가 부풀어 오른 세포에 과립형 침전물이 자주 나타납니다. 세포질이 액포화되어 세포가 둥글고 거칠어집니다. 심각한 경우 세포가 병 벽에서 떨어집니다. 시간이 지남에 따라 계대 배양해야만 세포가 계속해서 성장하고 번식할 수 있습니다.
3. 정상적인 조건에서 양액은 복숭아 빨간색입니다. 세포가 pH6.5~6.6으로 유지되면 세포가 떨어져서 죽습니다. 배지가 산성화되어 노란색으로 변하면 배지에 대사체가 일정량 축적되어 새로운 배지를 교체해야 함을 나타냅니다. HEPES를 배지에 첨가하거나 5% co2 인큐베이터에서 배양하면 pH를 비교적 안정적으로 유지할 수 있습니다. 양액의 교환시기는 양분의 섭취량에 따라 다릅니다. 세포가 왕성하게 자라면 2~3일에 한번씩 갈아주고, 성장이 느릴 때는 3~4일에 한번씩 갈아주면 됩니다. 다양한 세포가 pH 값에 대한 요구 사항이 다르다는 점에 특별한 주의를 기울여야 합니다.
4. 배양된 세포 배양물의 미생물 오염 후 미생물 오염, pH 값이 변하고 배양 배지가 탁하게 보일 것입니다. 박테리아 감염 후 박테리아의 움직임으로 인해 광학 현미경 아래에서 약간의 섬광이 있습니다. 진균 감염에서는 많은 사상균사와 때로는 군집된 포자가 현미경으로 관찰되었습니다. 마이코플라스마 오염은 일부 검출 방법을 통해서만 검출할 수 있습니다. 세포 오염 후에는 일반적으로 폐기해야 합니다. 중요한 세포주의 경우 관련 논문을 참조하여 오염을 제거하기 위한 몇 가지 조치를 소개할 수 있습니다. 중요한 실험과 소중한 세포는 최소 2명의 실험자가 독립적으로 또는 한 사람이 여러 번(다른 시간에) 배양 및 운영해야 합니다. 배양실의 위생 조건 외에도 공기 중의 습도는 미생물 오염과 밀접한 관련이 있습니다. 중요하고 장기적인 실험은 공기 습도가 낮은 가을과 겨울에 수행해야 합니다.
기타 주의사항:
첫째, 세포 상태를 확인하기 위해 자주 관찰합니다.
둘째, 항생제를 추가할지 여부입니다. 이것은 상황에 따라 다릅니다. 세포 배양 과정에서 관련 없는 불순물은 가능한 한 적게 첨가해야 합니다. 항생제는 또한 세포에 부담이 됩니다.
셋째, 태아 소 혈청의 해동. 혈청은 일반적으로 -20℃에서 보관하고 4℃의 냉장고에서 해동하는데 시간이 오래 걸리고 하루 전에 해동해야 합니다.